为什么我的PCR产物酶切之后什么也没有跑出来?我的PCR（反应体系25ul）扩增后5ul跑电泳显示出目的基因,然后我用剩下中的10ul和1 0 ×buffer 2 μL ,0.1% BSA 2 μL ,Fok I限制性内切酶( 2U / μL ) 1.25μL ,去

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/01 23:58:48
为什么我的PCR产物酶切之后什么也没有跑出来?我的PCR（反应体系25ul）扩增后5ul跑电泳显示出目的基因,然后我用剩下中的10ul和1 0 ×buffer 2 μL ,0.1% BSA 2 μL ,Fok I限制性内切酶( 2U / μL ) 1.25μL ,去

为什么我的PCR产物酶切之后什么也没有跑出来?我的PCR（反应体系25ul）扩增后5ul跑电泳显示出目的基因,然后我用剩下中的10ul和1 0 ×buffer 2 μL ,0.1% BSA 2 μL ,Fok I限制性内切酶( 2U / μL ) 1.25μL ,去
为什么我的PCR产物酶切之后什么也没有跑出来?
我的PCR（反应体系25ul）扩增后5ul跑电泳显示出目的基因,然后我用剩下中的10ul和1 0 ×buffer 2 μL ,0.1% BSA 2 μL ,Fok I限制性内切酶( 2U / μL ) 1.25μL ,去离子水补足体积至2 0 μL.3 7 ℃水浴反应1 2 h ,2%的琼脂糖凝胶电泳跑完后得到很浅很浅的两个切开的片段,根本就好像没有,我的DNA都到哪里去了,这是怎么回事?请高手指教,
我好像没有积分 不知道这样有没有人帮我?
我用的EB染色，我看到了切出来的很浅很浅很浅的带，几乎就看不见，原先的目的基因直接电泳特别亮啊，它不是变暗一点点的事。

为什么我的PCR产物酶切之后什么也没有跑出来?我的PCR（反应体系25ul）扩增后5ul跑电泳显示出目的基因,然后我用剩下中的10ul和1 0 ×buffer 2 μL ,0.1% BSA 2 μL ,Fok I限制性内切酶( 2U / μL ) 1.25μL ,去
PCR完了以后不能直接加酶切体系去做酶切.整个体系的离子浓度都不对的.这么切不切碎才怪.老老实实的PCR跑胶回收,或者PCR过柱回收再作酶切.变暗是因为体系不对都被切碎了星号反应.
另外PCR体系请扩大一下,25ul做克隆太少了.至少50ul.

你已经确定自己切开了那么就不存在DNA消失的问题，DNA消失属于操作错误但是见不到明亮条带原因可能来自于你用于染色的物质（不知道你是用EB还是GoldView还是别的什么），请注意显色原理是染色物质嵌入DNA双链之中，被切开后的片段比原片段小，能够结合的染色物质少，相应显色变弱是很正常的。如果你担心自己的DNA片段不见了，那么你可以做一个胶回收然后对回收产物测定一下吸光度值。...

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你已经确定自己切开了那么就不存在DNA消失的问题，DNA消失属于操作错误但是见不到明亮条带原因可能来自于你用于染色的物质（不知道你是用EB还是GoldView还是别的什么），请注意显色原理是染色物质嵌入DNA双链之中，被切开后的片段比原片段小，能够结合的染色物质少，相应显色变弱是很正常的。如果你担心自己的DNA片段不见了，那么你可以做一个胶回收然后对回收产物测定一下吸光度值。

收起

哇，我刚刚回答的怎没了
用3.0的胶跑下啦
胶太小空太大，片段切后变小了（起码有一个变为原来的一半）就跑没了

跑得时间太久了了~~跑掉了嘎~~~~??

为什么我的PCR产物酶切之后什么也没有跑出来?我的PCR（反应体系25ul）扩增后5ul跑电泳显示出目的基因,然后我用剩下中的10ul和1 0 ×buffer 2 μL ,0.1% BSA 2 μL ,Fok I限制性内切酶( 2U / μL ) 1.25μL ,去 PCR产物的酶切问题我用的PCR-RFLP法分析SNP：我的PCR产物有条带,可是我做酶切之后还是那条PCR产物的条带做了好几板都这样.病例和对照全做了,最后都没有切开的条带,这是怎么回事?十分感激. 电泳同时点了总DNA和PCR之后的产物以作对比,但总DNA没有条带,PCR产物的电泳条带很亮很清楚,为什么 pcr 电泳图 什么都没有我做的是RT-PCR,跑试剂盒的阳平对照之后,电泳图上什么也没有,不知是何原因,请各位前辈指教. 琼脂糖电泳没有条带的原因?我跑琼脂糖电泳,用的是梯度PCR扩增产物,但是跑出来之后没有条带,连marker也看不见,是什么原因?我的TBE没有灭菌,也没有调PH值,还有琼脂糖用了快3年了, PCR扩增实验之后,产物用琼脂糖凝胶电泳,为什么看不到光带?添加试剂没有问题 10x pcr buffer8月10日拿出来做了一次pcr,之后一直放在-20,今天拿出来做的时候,解冻后管内液面上有白色的沫,也不是很多,但我不记得以前做的时候有这种沫或者没这么多,而且今天pcr的产物跑完 酶切产物/PCR产物回收 PCR产物问题如图~第一张是taq酶跑出来的条带~有产物,大小780bp~marker是DL2000而第二次是高保真酶跑出来的电泳图,没有我的目的产物,只有很多二聚体这是为什么呢?我用的引物都是一样的~2次PCR pcr产物酶切Fermentas公司的内切酶说的PCR产物是质量ug,请问我要怎么样换算成体积ul 如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切?我的实验是在PCR产物电泳后发现有自己所需要的长度的目的片段.如果直接测序和经过连接转 为什么质粒与PCR产物一同跑电泳,质粒会比PCR产物跑的快呢?质粒是用水溶的 PCR电泳,为什么没有条带啊?PCR电泳,第一次跑,一条带都没有.第二次,六条带又有一条没有,这样的情况以前也出现过一次.可以保证到转录出CDNA这一步没有出错,之后操作也没出错.为什么没有了 为什么我的PCR产物有一半能跑出来啊还有一半什么都没有?做了2次都这样.我跑了十个样本，结果只有五个有条带（跟我需要的一样），另外五个什么都没有。我没说一定都能扩出来了，我只 对PCR扩增的产物进行酶切的方法? PCR产物酶切的问题我做的是PCR-RFLP法分析SNP：引物是参照文献设计,takara合成的.订购的是takara的Taq酶.PCR 条件也是文献中的,1%琼脂糖电泳显示PCR产物大小为290bp.用文献报道的Msp I文字1μL,PCR产物 如何对PCR扩增的产物进行酶切? 如何对PCR扩增的产物进行酶切?